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小片段回收(目的片段回收)

文章发布时间:2019-10-03 15:10:52
回收

小片段胶回收

楼主可以去生物帮啊,依托互联网,在注重科学性、实用性和权威性的前提下,提供最新、领先、精准、高效、全面的生物产品和技术信息。 回收目的片段的方法很多,常用的有冻融法,低熔点琼脂糖法,透析代法、电泳回收法、玻璃孔回收法等。本实验采用电泳回收法。通过特别的 V 形电泳槽,将挖出的含有目的片段的凝胶置于 V 形槽前,接通电泳电源, DNA 即进入 V 形管中,回收 V 形管中溶液即可, V 形管较小,回收的 DNA 片段能保持较高的浓度。 实验步骤 1. 大量酶切产物的电泳分离:琼脂糖为 0.8 %,选用大型电泳槽及厚梳子,并载低电压下电泳以提高分辨率。 2. 紫外灯下用刀片小心切出含 1000bpDNA 片段的凝胶。 3. 把凝胶片置于特制的 V 型槽平台上,在 V 型槽中加入 0.5 × TBE 电泳缓冲液(使其刚好淹过胶面),再在 V 型孔中加入 7MNH 4 Ac ,接通电源进行电泳。 4. 紫外灯下检测凝胶块是否含有 DNA ,判断 DNA 是否全部进入 V 形管溶液中。 参考: please click to connect www.bio1000.com/zt/dna/164670.html . can help you 5. 当 DNA 进入 V 形管中,放掉电泳槽中的缓冲液,吸出 V 形管中的溶液。 6. 溶液加两倍体积的无水酒精,混匀,置- 70 ℃ 两小时或者- 20 ℃ 过夜。 7.1200rpm 离心 10 分钟,沉淀用 70 %酒精洗一次,风干,加入 10ul 与 8ul TE 及 1ul 载样缓冲液混合,电泳检查并根据带的亮度估算其浓度。 注意事项 挖含目的 DNA 的凝胶时,尽量减少周围凝胶的带入。

小片段胶回收

DNA切胶后,加入3-4倍的溶胶液(注意不同的试剂盒加的不一样),带胶块完全溶解,然后慢慢加入1倍的异丙醇,边加边混匀,然后就加入到吸附柱中,后面的操作就按照试剂盒说明进行就可以了。

目的片段的切胶回收

需要,被切掉的部分同样带有粘性末端(因为粘性末端的碱基互补),会干扰目的片段与载体连接。
如果不想用胶回收方法纯化,可以选择吸附柱过滤除掉被切掉的小分子片段。
胶回收纯化的好处是直观的判断酶切实验结果是否理想,是否酶切完全,胶回收可以避免收集不完全酶切的质粒片段(包括完整的环状质粒和线性质粒)等等。

DNA片段的回收与纯化

DNA片段的回收与连接

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