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胶回收方法(胶回收怎么切胶)

文章发布时间:2019-11-09 16:11:53
回收

胶回收怎么切胶

应该是两条挨得很近的条带。
可能是pcr回收产物有杂带污染,跑pcr产物的时候没有分开,然后回收纯化以后,再跑就分开了。这个酶切之后跑电泳也是两条带。双酶切的话,没关系的,照样回收照样连,照样出结果。

切胶回收

不太清楚你用的是什么方法,不过用pH8.0的平衡酚(Phenol, equilibrated to pH 8.0)和酚-氯仿反复抽提效果还是不错的,一般后续试验,比如PCR或者连接都是可以的。不然可以考虑转膜的办法,可能可以更干净些?传统回收方法还是比较多的,可以参考一下。

参考资料:
http://cshprotocols.cshlp.org/cgi/search?fulltext=recovery+of+DNA+from&submit=yes&x=0&y=0

为什么要胶回收

您好!
① 切胶回收的样品一般包括PCR产物和各种酶切产物,回收用于连接进行质粒构建等。
② 电泳没有跑出来,可能是电泳的问题。。。好歹把样品留着吧。。。

百度教育团队【海纳百川团】为您解答。
感谢您的采纳,O(∩_∩)O 如有疑问,欢迎追问。

为什么胶回收后就没了

您好!
① 切胶回收的样品一般包括PCR产物和各种酶切产物,回收用于连接进行质粒构建等。
② 电泳没有跑出来,可能是电泳的问题。。。好歹把样品留着吧。。。

百度教育团队【海纳百川团】为您解答。
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胶回收步骤

  1. 琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段,任何类型或等级的琼脂糖都可以使用.我们强烈的建议您使用新鲜的TAE Buffer作为电泳缓冲液.不要重复使用电泳缓冲液,因为会因其PH的升高而减少产量.新鲜的TBE也可以用,但只能得到较低的产量.
  2. 当所需DNA片段完全分离时,转移凝胶至紫外灯上,尽可能快地把所需的DNA片段切下来.
  注:切胶时尽量把多余的凝胶切去,DNA曝露在紫外灯下不能超过30秒.
  3. 将带有目的片段的凝胶块转移至1.5ml离心管(离心管已经称重了)中,称重得出凝胶块的重量.近似地确定其体积.假设其密度为1g/ml(几乎所有DNA凝胶的密度都可以近似为1g/ml),于是凝胶块的体积便可通过如下方法得到:凝胶薄片的重量为0.2g, 则其体积为
  0.2 ml.加入等体积的Binding Buffer(XP2),于55-65℃水浴中温浴7min或至凝胶完全融化,每2-3 min振荡或涡旋混合物.
  重要提醒:在凝胶完全溶解之后,注意凝胶-Binding buffer混和物的pH值.如果其pH值大于8的话,DNA的产量将大大减少.观察混和物的颜色,如果是橙色或红色,则要加入5 ul 浓度为5 M,pH为5.2的醋酸钠,以调低其pH值.经过这一调节,该混合物的颜色将恢复为正常的浅黄色.
  4. 取一个干净的HiBind DNA Mini柱子装在一个干净的2ml收集管内(已备好).
  5. 将第三步获得的DNA/熔胶液全部转移至柱子中.室温下10,000 x g离心1分钟.弃收集管中的滤液,将柱子套回2ml收集管内.
  6. 如果DNA/凝胶熔液的体积超过700ul,一次只能转移700ul至柱子中,余下的可继续重复第5步至所有的溶液都经过柱子.每一个Hibind DNA回收纯化柱都有一个极限为25gDNA的吸附能力.如果预期产量较大,则把样品分别加到合适数目的柱子中.
  7. 弃收集管中的滤液,将柱子套回2ml收集管内.移300ul Binding Buffer(XP2)至柱子中,室温下, 10,000 x g下离心1min.
  8. 弃收集管中的滤液,将柱子套回2ml收集管内.移700ul SPW Wash buffer(已用无水乙醇稀释的)至柱子中.室温下10,000xg离心1min.
  注意:浓缩的SPW Wash Buffer 在使用之前必须按标签的提示用乙醇稀释.如果DNA 洗涤缓冲液在使用之前是置于冰箱中的,须将其拿出置于室温下.
  9. 重复用700ul SPW Wash buffer洗涤柱子.室温下10,000xg离心1min.
  10. 弃收集管中的滤液,将柱子套回2ml收集管内.室温下,13,000 x g离心2 min以甩干柱子基质残余的液体.
  11. 把柱子装在一个干净的1.5ml离心管上,加入15~30ul(具体取决于预期的终产物浓度)的Elution Buffer(或TE缓冲液)到柱基质上,室温放置1min, 13,000xg离心1min以洗脱DNA.
  第一次洗脱可以洗出70-80%的结合DNA. 如果再洗脱一次的话,可以把残余的DNA洗脱出来,不过那样的浓度就会较低.

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