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胶回收试剂(wb做胶需要哪些试剂)

文章发布时间:2019-10-23 15:10:42
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wb做胶需要哪些试剂

试剂:tris、Hcl、Nacl、脱脂牛奶、甲醇、甘氨酸、tuwen20、一抗、二抗、显色剂及SDS-PAGE需要的试剂(tris、Hcl、TEMED、SDS、过硫酸铵、丙烯酰胺、N,N-甲叉双丙烯酰胺、甘氨酸、非预染蛋白Marker、甲醇、乙酸、考马斯亮蓝R250)、预染蛋白Marker
耗材:滤纸、PVDF膜或NC膜、乳胶手套等
仪器:电泳仪、电转槽、摇床、制冰机(电转时需冰浴)等

胶回收试剂配方

胶跑完后蛋白就存在与条带中。用锋利的刀切割条带,放入离心管,再用胶回收试剂盒除去胶,获得蛋白。

胶回收各试剂作用

胶跑完后蛋白就存在与条带中。用锋利的刀切割条带,放入离心管,再用胶回收试剂盒除去胶,获得蛋白。

自制胶回收试剂

如果确定PCR产物很纯(没有引物二聚体),完全可以用PCR产物纯化试剂盒。
如果PCR产物不是很纯,或者PCR扩增条带比较小,PCR产物前面又有较多引物二聚体时,用胶回收,其余用PCR产物纯化试剂盒。
pcr纯化试剂盒和胶回收试剂盒的区别:
PCR纯化试剂盒:是直接水溶解的PAC产物就可以回收,回收效率高,但是只适合单一条带需要纯化测序的时候使用。
PCR凝胶试剂盒:是在PCR产物是混合物,有多条杂带的情况下,先跑胶将杂带分离,然后在将所要的条带位置的胶切下回收,后者的回收效率低,但是很纯净。
胶回收试剂盒操作步骤:
配制琼脂糖EB凝胶,电泳以分离DNA片段。任何类型或等级的琼脂糖都可以使用。
电泳足够时间后,在紫外灯下小心地把所需的DNA的片段切下来。并尽量去除多余的凝胶。
称取空离心管的重量,切下带目的片段的凝胶装在1.5ml离心管中并称其重量,求出凝胶块的重量,近似地确定其体积。一般情况下,凝胶的密度为1g/ml,于是凝胶的体积与重量的关系可按下面换算:凝胶薄片的重量为0.2g 则其体积为0.2ml;加入等倍凝胶体积的Binding Buffer,把混合物置于55℃~65℃水浴中温浴7min至凝胶完全融化,其间每隔2-3分钟混匀一次;
转移700μl的DNA-琼脂糖溶液到一个HiBindTM DNA柱子,并把柱子装在一个干净的2ml收集管内,室温下,10,000×g离心1min,弃去液体。
将柱子重新套回收集管中,加300μl Binding Buffer至HiBind DNA 柱子中;室温下,10,000×g离心 1分钟,去弃滤出液;这一步相当关键,不要忽略此步。
将柱子重新套回收集管中,加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中,室温下,10,000×g离心1分钟,去弃滤出液;注:SPW Wash buffer在使用前必须按瓶子标鉴要求用无水乙醇进行稀释。
将柱子重新套回收集管中,重复加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中,室温下,10,000×g离心1分钟,去弃滤出液;
弃去液体,将空柱子重新套回收集管中,10,000×g离心1min以甩干柱基质残余的液体。
这步可以去除柱子基质上残余的乙醇,不要省略此步―――对得到好的DNA产量是十分重要的。
把柱子装在一个干净的1.5ml离心管上,加入30~50μl洗脱液或灭菌水上柱子膜上,10,000×g离心1分钟,离心管中的溶液就是纯化的DNA产物,保存于-20度。

胶头滴管取用试剂后倒置

(1)胶头滴管内会残留的酸性或碱性试剂,会污染腐蚀橡胶乳头.
(2)试剂瓶标签没有向着手心,留下的试剂腐蚀标签.
(3)加热固体时,试管口没有略向下倾斜,生成的水倒流,引起试管炸裂.
(4)蒸发溶剂时,未用玻璃棒搅拌,可能会造成液体外溅.
故答为:(1)腐蚀橡胶乳头;(2)药品腐蚀标签;(3)试管破裂;(4)液体外溅.

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