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核酸回收(核酸电泳和片段回收)

文章发布时间:2019-10-21 00:10:45
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核酸电泳和片段回收

您好!
① 切胶回收的样品一般包括PCR产物和各种酶切产物,回收用于连接进行质粒构建等。
② 电泳没有跑出来,可能是电泳的问题。。。好歹把样品留着吧。。。

百度教育团队【海纳百川团】为您解答。
感谢您的采纳,O(∩_∩)O 如有疑问,欢迎追问。

目的DNA片段的回收

全自动核酸电泳

凝胶类型不一样,一个是琼脂糖,一个是聚丙烯酰胺,原理都是分子筛,电泳缓冲系统和样品buffer不一样,还有蛋白质电泳一般是垂直电泳,核酸一般是水平电泳;染色剂不一样

天根试剂盒pcr产物回收率

有好几年没做实验了过我对1楼回答有些疑问现有能做23000bp长PCR似乎我印象PCR要长长度本身难能全长扩增吧我理解没错楼主直接从土壤细菌里头直接提取DNA(呵呵我也忘了细菌DNA大概多长)跑了次电泳把目片断割下来再纯化再跑电泳发现纯化之片断比目片断小了检测回收率DNA溶解液过柱之柱子洗脱之前柱子上加试剂盒溶解液吹打几次吸取些溶液A同时吸取些离心下来溶液B再过柱洗脱液C及未过柱前溶液D(浓度太低相应浓缩)肆溶液再上次凝胶电泳切都看得明明白白究竟过柱过程DNA底留了地方我相信有电泳图应该容易理解问题所了当问题有能象1楼所说样天根产品过关(或者自己没有选对)换柱子

普通pcr与胶回收

如果确定PCR产物很纯(没有引物二聚体),完全可以用PCR产物纯化试剂盒。
如果PCR产物不是很纯,或者PCR扩增条带比较小,PCR产物前面又有较多引物二聚体时,用胶回收,其余用PCR产物纯化试剂盒。
pcr纯化试剂盒和胶回收试剂盒的区别:
PCR纯化试剂盒:是直接水溶解的PAC产物就可以回收,回收效率高,但是只适合单一条带需要纯化测序的时候使用。
PCR凝胶试剂盒:是在PCR产物是混合物,有多条杂带的情况下,先跑胶将杂带分离,然后在将所要的条带位置的胶切下回收,后者的回收效率低,但是很纯净。
胶回收试剂盒操作步骤:
配制琼脂糖EB凝胶,电泳以分离DNA片段。任何类型或等级的琼脂糖都可以使用。
电泳足够时间后,在紫外灯下小心地把所需的DNA的片段切下来。并尽量去除多余的凝胶。
称取空离心管的重量,切下带目的片段的凝胶装在1.5ml离心管中并称其重量,求出凝胶块的重量,近似地确定其体积。一般情况下,凝胶的密度为1g/ml,于是凝胶的体积与重量的关系可按下面换算:凝胶薄片的重量为0.2g 则其体积为0.2ml;加入等倍凝胶体积的Binding Buffer,把混合物置于55℃~65℃水浴中温浴7min至凝胶完全融化,其间每隔2-3分钟混匀一次;
转移700μl的DNA-琼脂糖溶液到一个HiBindTM DNA柱子,并把柱子装在一个干净的2ml收集管内,室温下,10,000×g离心1min,弃去液体。
将柱子重新套回收集管中,加300μl Binding Buffer至HiBind DNA 柱子中;室温下,10,000×g离心 1分钟,去弃滤出液;这一步相当关键,不要忽略此步。
将柱子重新套回收集管中,加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中,室温下,10,000×g离心1分钟,去弃滤出液;注:SPW Wash buffer在使用前必须按瓶子标鉴要求用无水乙醇进行稀释。
将柱子重新套回收集管中,重复加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中,室温下,10,000×g离心1分钟,去弃滤出液;
弃去液体,将空柱子重新套回收集管中,10,000×g离心1min以甩干柱基质残余的液体。
这步可以去除柱子基质上残余的乙醇,不要省略此步―――对得到好的DNA产量是十分重要的。
把柱子装在一个干净的1.5ml离心管上,加入30~50μl洗脱液或灭菌水上柱子膜上,10,000×g离心1分钟,离心管中的溶液就是纯化的DNA产物,保存于-20度。

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